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细菌糖类总量硫酸-苯酚比色法定量检测试剂盒产品说明书
点击次数:119 发布时间:2023-09-19
 


 

细菌糖类总量硫酸-苯酚比色法定量检测试剂盒品说明书

 

主要用途

 

细菌糖类总量硫酸-苯酚比色法定量检测试剂是一种旨在通过硫酸处理后,水解产生单糖,与苯酚反应,生成黄色产物,即采用比色法测算糖类总量而经典的技术方法。该技经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种细菌细胞样品中糖类总量检测。产品即到即用,操作简捷,性能稳定,检测敏感

 

技术背景

 

糖类(saccharide),又称为碳水化合物(carbohydrate),其分成四类:单糖(monosaccharide;例如葡萄糖)、二糖(disaccharide;例如蔗糖)、寡糖(oligosaccharide;棉籽糖)和多糖(polysaccharide;例如淀粉和糖原)。糖类构成辅酶和核酸,以及细胞结构的重要元素,在能量储存、免疫功能、授精、预防病理变化、血液凝结、发育等方面具有重要作用。使用浓硫酸,将复杂性多糖水解成单糖,脱水产生反应性中间产物,与苯酚反应,生成黄色产物,在分光光度仪(492nm 波长)下出现吸光峰值的变化,来定量测定样品中糖类量的总含量。 

 

产品内容

 

稀释液(Reagent A                    5毫升

反应液(Reagent B                    5毫升

酸性液(Reagent C                   25毫升

标准液(Reagent D                  500微升

裂解液(Reagent E                   10毫升

产品说明书               1

 

保存方式

 

保存在4冰箱里酸性液(Reagent C具有腐蚀性,注意操作安全;反应液(Reagent B)避免光照;有效保证6

 

用户自备

 

1.5毫升离心管:用于标准样品配制和反应的容器

干式恒温仪或恒温水槽:用于反应孵育

超声仪:用于裂解细菌细胞

比色皿:用于比色的容器

分光光度仪:用于比色分析

 

 

 

实验步骤

 

一、 样品准备

 

1. 准备好10毫升待测的细菌放进37摇床孵育16小时,速度为220RPM

2. 直至OD6000.40.8,即12 X 107细胞/毫升

3. 置于冰槽里5分钟

4. 放进4℃台式离心机离心5分钟,速度为1000g

5. 小心抽去上清液

6. 加入500微升裂解液(Reagent E,充分混匀

7. 转移到预冷的1.5毫升离心管

8. 强力涡旋震荡15

9. 置于超声仪下:200瓦,50%功率,10秒一次,重复3

10. 冰槽里静置15分钟

11. 放进4℃微型台式离心机离心15分钟,速度为16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415

12. 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管

13. 移取10微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-30030.1

14. 即刻放进-70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

 

二、标准样品配制

 

1. 准备好51.5毫升离心管,标记为15号管

2. 分别加入200微升稀释液(Reagent A到每个离心管

3. 移取200微升标准液(Reagent D1号管,混匀

4. 小心移取200微升1号管稀释的标准液(Reagent D2号管,混匀

5. 小心移取200微升2号管稀释的标准液(Reagent D3号管,混匀

6. 小心移取200微升3号管稀释的标准液(Reagent D4号管,混匀

7. 15号管放进冰槽里备用,避免光照;标准管浓度见下表

 

管号

 标准液(Reagent D

稀释液(Reagent A

测定体系中

标准麦芽糖含量

1

200微升

200微升

50微克

2

200微升1号管

200微升

25微克

3

200微升2号管

200微升

12.5微克

4

200微升3号管

200微升

6.125微克

5

——

200微升

0

 

 

三、 样品测定

 

1. 设定好分光光度仪:波长492nm,并置零

2. 分别移取200微升反应液(Reagent B1.5毫升离心管

3. 分别加入200微升上述制备的标准样品或待测样品,混匀

4. 分别加入1毫升酸性液(Reagent C,混匀

5. 80干式恒温仪孵育30分钟(注意:如果复杂多糖无法充分水解,建议使用煮沸530分钟处理)

6. 室温下冷却10分钟,避免光照

7. 转移到新的比色皿

8. 即刻放进分光光度仪检测(492nm波长):获得吸光读数

9. 构建标准曲线:纵座标(Y轴)为吸光读数;横座标(X轴)为标准麦芽糖含量微克

10. 根据标准曲线获得样品对应麦芽糖含量(微克)

11. 计算样品实际麦芽糖浓度(微克/毫升) 

 

【根据标准曲线获得样品对应麦芽糖含量(微克)÷0.2(样品容量:毫升)】×10(样品稀释倍数)=微克/毫升

 

注意事项

 

1. 本产品为25次操作,包括标准液

2. 本产品适用于还原性、非还原性糖类、寡糖以及复杂性糖类,但不适合于氨基糖或脱氧糖及其衍生物

3. 本产品检测范围为0.250微克糖类总量

4. 本产品适用于96孔板操作,实际用量按比例减少

5. 操作时,须戴手套

6. 酸性液(Reagent C具有腐蚀性,注意操作安全

7. 孵育时,避免光照

8. 如果待测样品浓度过高或过低,可以稀释样品用量;注意在计算实际浓度时,不要忘记稀释倍数调整

9. 糖类总量表述方式:微克麦芽糖/毫升;微克麦芽糖/细胞量;微克麦芽糖/总蛋白量

10. 本公司提供系列糖类检测试剂产品

 

质量标准

 

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定检测敏感

 

 


 
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