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特殊石蜡切片总胆固醇(酯酶法)菲律宾(FILIPIN)荧光直接染色试剂盒
点击次数:136 发布时间:2023-09-13
 

特殊石蜡切片总胆固醇(酯酶法)菲律宾(FILIPIN)荧光直接染色试剂盒

产品说明书

 

主要用途

 

特殊石蜡切片总胆固醇(酯酶法)菲律宾(FILIPIN)荧光直接染色试剂是一种旨在通过特殊脱蜡处理,进而使用胆固醇酶水解荧光染料菲律宾(FILIPIN特异性与游离胆固醇反应,形成复合体,并产生蓝色荧光,分析石蜡包埋组织切片中总胆固醇的而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于各种人体和动物组织石蜡切片中总胆固醇的检测。广泛用于组织病理生理的研究。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,荧光清晰。

 

技术背景

 

胆固醇(cholesterol)是一类称之为固醇类(sterols)或聚类异戊二烯(polyisoprenoid)或三萜皂甙元(triterpene)的多环化合物(polycyclic compound)。其分子式为cholest-5-en-3β-ol。胆固醇以游离(free form)和脂化结合(ester)两种形式广泛存在于所有动物组织中,主要以非脂化形式存在于细胞膜中。在膜功能和脂代谢以及激素合成中起着重要作用。菲律宾(FILIPIN)是一类由四种同分异构体的多烯抗生素(polyene antibiotics)或多马霉素(polyene macrolide)的总称。源自于S. FILIPINENSIS细菌的培养液中。其分子式为C35H58O11,分子量为654.8。首先胆固醇酯酶(cholesterol esterase)的水解下,酯化胆固醇(cholesterel ester转化为游离胆固醇,然后使用菲律宾与所有游离胆固醇结合形成聚集体或复合物,产生荧光。由于石蜡包埋的组织切片在去石蜡的过程中,有机溶剂诸如二甲苯等容易破坏和减少组织中的脂质成分,因此使用非二甲苯类脱蜡,以保护组织中的胆固醇成分是菲律宾染色的关键。

 

产品内容

 

脱蜡液(Reagent A                 20毫升

净化液(Reagent B             5毫升

清理液(Reagent C            20毫升

水解液(Reagent D             4毫升

抗干扰液(Reagent E            4毫升

染色液(Reagent F             2毫升

产品说明书                1

 

保存方式

 

保存水解液(Reagent D)和染色液(Reagent F在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存4℃冰箱里有效保证6

 

用户自备

 

荧光显微镜:用于样品染色后观察分析

实验步骤

 

一、 脱蜡处理

 

1. 取出待测的6微米厚的石蜡包埋的组织切片

2. 放进80℃烘箱,孵育30分钟

3. 取出组织切片

4. 小心加上500微升脱蜡液(Reagent A在切片上,铺满整个切片样品表面(注意:使用前,摇匀脱蜡液)

5. 放进70℃恒温培养箱里孵育5分钟

6. 即刻小心移去切片上的脱蜡液(Reagent A

7. (选择步骤)重复实验步骤24一次

8. 小心加上200微升净化液(Reagent B在切片上,铺满整个切片样品表面

9. 室温下孵育2分钟

10. 小心移去切片上的净化液(Reagent B

11. 进一步依次常规净化处理:用户自备的100%乙醇、70%乙醇、50%乙醇

12. 小心加上200微升清理液(Reagent C在切片上,铺满整个切片样品表面

13. 室温下孵育3分钟

14. 小心移去切片上的清理液(Reagent C

三、样本染色处理

1. 小心加200微升水解液(Reagent C,铺满整个样品表面

2. 室温下孵育1小时(注意:可以延长至4小时,避免干枯)

3. 小心移去水解液(Reagent D

4. 小心加200微升清理液(Reagent C),清洗样品表面

5. 小心移去清理液(Reagent C

6. 重复实验步骤45一次

7. 小心加上200微升抗干扰液(Reagent E,铺满整个切片样品表面

8. 室温下孵育10分钟

9. 小心移去切片上的抗干扰液(Reagent E

10. 小心加上100微升染色液(Reagent F,铺满整个切片样品表面

11. 室温下孵育30分钟,避免光照

12. 小心移去切片上的染色液(Reagent F

13. 小心加上200微升清理液(Reagent C),清洗样品表面

14. 小心移去切片上的清理液(Reagent C

15. 重复实验步骤1314二次

16. 即刻放上盖玻片或封片

17. 在荧光显微镜下观察:激发波长:340nm;散发波长:430nm――胆固醇阳性呈现蓝色荧光

 

注意事项

 

1. 本产品为20次操作

2. 操作时,须戴手套

3. 建议用户避免使用常规石蜡包埋组织切片,即石蜡包埋前避免二甲苯等透明处理

4. 操作时,避免污染母液

5. 试剂溶液在样品表面时,避免有气泡存在,同时确保铺满样品表面

6. 荧光容易受到光漂白(photobleach),建议使用抗淬灭剂12058.2

7. 样品染色完成后,即刻进行荧光显微镜观察 

8. 本公司提供系列组织细胞胆固醇染色试剂产品

 

质量标准

 

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定荧光清晰


 
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